Subject: Focused Peptide Mapping Исследование характеристик лекарственного веществаВ оглавлении пункт: Focused Peptide Mapping with LC-MS for Deamidation Determination Сам абзац к которому этот пункт относится не прояснил значения слова Focused..... |
Еще вопрос что такое за пептидные карты: Non-reduced and reduced peptide maps Карты созданные в условиях восстановления и в невосстанавливающих условиях... Помогите кто может и по предыдущему вопросу также. |
|
link 10.01.2011 9:01 |
Полагаю, что в Вашем случае пептидное картирование представляет собой двумерный электрофорез с изоэлектрофокусированием, как здесь, например: http://ru-patent.info/21/20-24/2124024.html Для разделения используют градиент рН, создаваемый с помощью амфолитов. Напряжение прикладывают сначала в одном направлении, а потом в перпендикулярном, получается двумерная картинка. Вот здесь описана техника эксперимента: http://195.178.207.228/work/FILES/19/2D-PAGE.pdf Термины "восстанавливающие" и "невосстанавливающие условия" широко используются в контексте электрофоретического разделения белков. Имеются в виду условия, восстанавливающие дисульфидные мостики, и условия, препятствующие их образованию. При этом молекула протеина имеет разную пространственную структуру. |
Да нет там о электрофорезе и изоэлектрическом фокусировании речи нет. Абзац с объяснением принципа метода очень большой не могу привести. Буду думать далее. Спасибо!! |
|
link 10.01.2011 10:04 |
А что, Вы думаете, там пептидную карту на бумаге делают? Мне кажется, отбирают из геля фракцию с определенным значением рI и дальше проводят анализ ЖХ-МС, получая хроматограммы, подтверждающие присутствие деамидированных остатков. Конечно, перед Вами весь текст, так что Вам виднее. А то я много чего придумать могу)) |
To OlgaAvdeeva Огромное и настоящее Спасибо. Извините если я что не так сформулировал, Ваша помощь для меня действительно очень ценна и..ну не специалист я в этом вопросе. просто пытаюсь разобраться по инструкции, а в инструкции ничего ИМЕННО МНЕ непонятно... Я рискну привести весь абзац: 3.2.S.3.1.5.13 Focused Peptide Mapping with LC-MS for Deamidation Determination (SOP DET-3189) A tryptic peptide mapping method coupled with MS detection is used to determine the deamidation levels in belimumab samples. This method is used to quantitatively measure deamidation at peptide T4(H), which has been found to be the primary deamidation site for belimumab. The method is also used to monitor deamidation of peptides T25(H) and T36(H) that have been found to be susceptible sites of deamidation under stress conditions. Principle Sampling Еще раз огромное Вам спасибо, ой нет СПАСИБО!! |
|
link 10.01.2011 10:36 |
Да, действительно, мы привыкли называть пептидным картированием другие методики. Наверное, можно и эту методику так назвать, поскольку она предназначена для определения аминокислотной последовательности, да и пробоподготовка похожая. Название инструкции можно перевести, как Вы написали в первом посте. Как говорится, за что купили, за то и продаем. Если есть вопросы по приведенной здесь методике ЖХ-МС, пишите на почту, или задавайте вопросы в этой ветке, тема мне хорошо знакома. |
|
link 10.01.2011 10:51 |
Белимумаб расщепляют с помощью трипсина, а затем разделяют полученные куски на ЖХ, оснащенном диодно-матричным детектором и соединенном с масс-спектрометром (по существу это второй, масс-спектрометрический детектор, присоединенный к хроматографу). О степени деамидирования исходного белка судят по площади пика деамидированного остатка. |
ОК! Спасибо. |
You need to be logged in to post in the forum |