C to G nucleotide change; клонировали vs встраивали

link 20.01.2011 12:56

Subject: C to G nucleotide change; клонировали vs встраивали gen.eng.

Оригинал:
The 3' primer was designed to eliminate the SalI restriction site by introducing a C to G nucleotide change in the SalI restriction site sequence. The amplified PCR fragment was digested with BssHII and BamHI and the digested DNA fragment was then cloned into the parental pEU1 vector at the BssHII and BamHI sites.

Мой вариант:
3' праймер разработали (или сконструировали - как правильно??) для того чтобы удалить SalI сайт рестрикции, посредством введения нуклеотидной замены C на G в последовательности рестрикции SalI сайта. Амплифицированный PCR фрагмент расщепляли с использованием BssHII и BamHI и расщепленный ДНК фрагмент, затем, клонировали/встраивали (??) в родительский pEU1 вектор на сайтах BssHII и BamHI.

Вопросы:
1. Правильно ли я понял, что это замена C нуклеотида на G нуклеотид??
2. Как правильно клонировали в вектор или встраивали в вектор??
Заранее благодарен.

xand ✉

link 20.01.2011 13:56

3` праймер разработали (а лучше подобрали), но вряд ли сконструировали - так не пишут.
... введения нуклеотидной замены C на G в сайте рестрикции SalI
расщепленный (или подвергшийся ферментативному гидролизу - так более по-книжному) ДНК фрагмент (лучше фрагмент ДНК)
... клонировали (можно и встраивали, но лучше клонировали или субклонировали)
в родительский pEU1 вектор (родительский здесь лишнее, смысловой нагрузки не несет, просто вектор или плазмидный вектор)
... по сайтам BssHII и BamHI

ochernen ✉

link 20.01.2011 14:13

To xand: Спасибо Большое!
Подскажите что это за клон плазмидный .....single sequence-confirmed plasmid clone.....
Оригинал:
The VH domain from a single sequence-confirmed plasmid clone obtained in Step 2 was isolated after digestion with BssHII and BamHI and cloned into the modified pEU1 vector obtained in Step 1 at the BssHII and BamHI site.
Спасибо заранее!!

xand ✉

link 20.01.2011 14:26

К сожалению, не могу сказать точно, не зная процедуры Step 2
Предполагаю, что домен VH получен путем ферментативного гидролиза с помощью эндонуклеазы рестрикции BssHII плазмиды, выделенной из одного из клонов, полученных в результате проведения этого самого Step 2, с последующим секвенированием для подтверждения нуклеотидной последовательности, и затем клонирован в модифицированный вектор трам-пам-пам.

ochernen ✉

link 20.01.2011 14:50

Спасибо!
К сожаление не знаю как вставить картинку из документа в пдф сюда там на схеме вроде так как Вы объяснили.
С уважением, ochernen

ochernen ✉

link 20.01.2011 15:19

Аааааааааа! Памагиииите! Xand и др. Извините это снова я. Подскажите пожалуйста:
human cytomegalovirus major immediate early promoter

это немедленно-ранний/предранний промотор цитомегаловируса человека, а вот слово major означает, что его используют в качестве первого промотора, или его можно вообще опустить???
Оригинал:
hCMV-MIE: human cytomegalovirus major immediate early promoter.
L: leader sequence.
VL: light chain variable domain.
CL: light chain constant domain.

Просто идет перечисление условных обозначений в схеме.
Спасибо.
С уважением, ochernen

xand ✉

link 20.01.2011 15:23

К сожалению, здесь помочь не смогу: никогда не работал с высшими эукариотами и их вирусами :(
Вам к Dimpassy.

ochernen ✉

link 20.01.2011 15:31

To xand: Спасибо! Вы мне очень много помогли. Снимаю шляпу.
С уважением, ochernen

To Dimpassy: Не поможете с вопросом,аААААА??
Заранее благодарен

ochernen ✉

link 20.01.2011 15:37

Еще маааахонський вопрос:
glutamine synthetase gene complementary DNA
это кДНК гена глутаминсинтетазы прааально??
Все больше не беспокою Спасибо.

Dimpassy ✉

link 20.01.2011 16:07

1) основной вариант, вероятно
2) должно быть так

ochernen ✉

link 20.01.2011 16:11

To Dimpassy: Спасибо! Только отослал Вам личное сообщение и Вы тут же ответили. Спасибо.

You need to be logged in to post in the forum

Get short URL