DictionaryForumContacts

 ochernen

link 3.02.2011 15:14 
Subject: µBCA что это за анализ?? biochem.
Оригинал:
The centrifugation step was shown to have no impact on the protein content determined
in the supernatant using the µBCA method.

Вот еще что нарыл в Гугле:
1) After centrifugation at 12000 g for 5 minutes, the protein concentration of the supernatant was determined using a μBCA assay...
2) Protein concentration was determined with the μBCA protein assay (Pierce) using bovine serum albumin as a standard.
3) The total protein concentration was quantified using a standard protein assay (μBCA) and a standard curve of mixed myoglobin and lysozyme solutions at ....

Вопрос:
можно ли назвать это µBCA method как метод количественного анализа белка с использованием стандарта μBCA?? Или у него есть другое название??

Кто сталкивался подскажите пожалуйста.
Заранее благодарен.

 OlgaAvdeeva

link 3.02.2011 15:23 
Раздел ГФ 12 "Определение белка. Колориметрические методы":

4. Метод с бицинхониновой кислотой

Метод основан на восстановлении двухвалентного иона меди в одновалентный при взаимодействии с остатками цистеина, цистина, триптофана, тирозина, пептидной связью белка и образовании окрашенного комплекса CU+ с бицинхониновой кислотой (2,2'-бихинолин-4,4'-дикарбоновая кислота-БХК). Определению мешают восстанавливающие вещества: сахара, аскорбиновая кислота, тиоловые соединения, этилендиаминтетраацетат. Влияние мешающих веществ может быть уменьшено разбавлением испытуемого раствора или устранено отделением белка путем его осаждения, описанного в методе Лоури. Интенсивность окраски образующегося комплекса зависит от природы белка, поэтому белок стандартного образца должен быть тот же, что и в испытуемом образце.
Методика. К 0,1 мл испытуемого раствора, содержащего 0,025-0,05 мг белка; 0,1 мл раствора стандартного образца белка и к 0,1 мл растворителя, используемого для приготовления испытуемого раствора, прибавляют 2 мл реагента меди с БХК. Выдерживают растворы при 37 град. C в течение 30 мин., охлаждают при комнатной температуре и через 60 мин. (от конца выдержки при 37 град. C) измеряют оптическую плотность испытуемого и стандартных растворов на спектрофотометре при длине волны 562 нм в кюветах с толщиной слоя 10 мм относительно раствора сравнения.
Содержание белка в испытуемом растворе рассчитывают по калибровочному графику.
Примечания
1. Приготовление БХК-реагента. В мерной колбе вместимостью 1 л в воде растворяют 10 г бицинхониновой кислоты (БХК) или ее динатриевой соли, 20 г натрия карбоната моногидрата, 1,6 г натрия тартрата, 4 г натрия гидроксида, 9,5 г натрия гидрокарбоната, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают; pH полученного раствора должен быть 11,25. При необходимости pH доводят раствором натрия гидроксида 10% или натрия гидрокарбоната 5%.
2. Приготовление реагента меди с БХК. Смешивают 1 мл 4% раствора меди сульфата и 50 мл БХК-реагента.

 ochernen

link 3.02.2011 15:54 
Спасибо, а что означает эта буква мю в µBCA??
Чисто для повышения образованности...или это просто обозначения БХК??

 OlgaAvdeeva

link 3.02.2011 16:00 
микро- бывает и макрометод

 ochernen

link 3.02.2011 16:26 
Спасибо Огромадное!!
С уважением, ochernen

 

You need to be logged in to post in the forum